流式細胞儀檢測A172細胞凋亡的實驗報告實驗報告書
一、 實驗儀器與試劑
表格一：實驗儀器
儀器 | 廠家 | 型號 |
細胞培養(yǎng)箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
低溫高速離心機 | 64R | BECKMAN |
流式細胞儀 | BD | FACS Calibur |
表格二：試劑
試劑 | 廠家 |
DMEM 培養(yǎng)液 | Hyclone |
胎牛血清 | Gibco |
無鈣、鎂 PBS 7.4 (0.1 M) | 自配 |
Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒 | BD |
二、 實驗步驟
細胞培養(yǎng) 取對數(shù)生長期的 A172 細胞，按 1*105個/mL 以 1mL 體積接種于 6 孔板內(nèi)。無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜,到轉(zhuǎn)染時使細胞達到 70％的匯合率。
轉(zhuǎn)染
將 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中,混合均勻。
將 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中，混合均
勻。在室溫下孵育 5 分鐘。
將上述兩種混合物混合（總體積 800uL）,輕輕混合均勻在室溫下孵育
20 分鐘形成復(fù)合物。
在 6 孔板中每孔加入 800uL 復(fù)合物。十字法混合均勻。
細胞在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6h 后棄上清液,并加入 10％胎牛血
清的 DMEM 培養(yǎng)液。
染色 消化并離心收集細胞（1000rpm/min）后棄上清，加入無鈣、鎂 PBS 1mL 洗
2 次，離心后棄上清。分別加入 100μL binding buffer、5μL Annexin V-FITC 和 5μL
PI 溶液，室溫避光孵育 15min。
4. 檢測
加入 400μL binding buffer 后以標(biāo)準(zhǔn)程序用流式細胞儀檢測，汞激發(fā)波長
488nm，計數(shù) 1 萬個細胞。
三、 實驗結(jié)果
省略
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
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