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293細胞無血清懸浮培養基產品使用方法
更新時間:2021-11-23   點擊次數:2006次

293細胞無血清懸浮培養基產品使用方法

產品描述

Balance CD 293 培養基適用于懸浮培養條件下的HEK293細胞(如293-F,293-T, Expi-293F

等)的高密度生長和瞬時轉染表達。 Balance CD 293 培養基含有細胞生長所需的全部營養成

份,無需添加任何添加物即可使用。(注意:此培養基不包含抗生素以及血清)

 

產品特點

?? 瞬時轉染專用培養基,適用于HEK293細胞高密度懸浮培養

?? 無蛋白、無動物源、化學成分限定

?? 即用型*培養基,無需添加額外成分

基礎參數

外觀:澄清透明紅色液體

滲透壓:275±15 mOSM

pH:6.9-7.4

無菌檢測:無菌

內毒素: <5 EU/mL

儲存條件:2-8℃,避光

效期:12個月

產品用途:僅用于科學研究,不適用于人類或動物的診斷和治療

產品使用方法

細胞馴化

1)直接馴化

大部分情況下,培養于其他培養基中的細胞,可以直接適應Balance CD 293 medium,只要

按照日常傳代方式(稀釋)更換培養基即可。

2)漸進式馴化

注意:選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化

在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代23次至細胞生長穩定,當細胞密度達到2x106 cells/ml后進行傳代,傳代細胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL,5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為75:25;

將細胞置于37℃,5% CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養;

當細胞密度3-4天后達到3x106 cells/ml且細胞活率>90%,傳代時5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為50:50,細胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如細胞生長慢,可離心上清,留20%條件培養基,加入80%5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基比例為75:25的混合培養基,繼續培養;

重復步驟逐步增加Balance CD 293培養基所占的比例(5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基的比例為25:7510:90)直到100%Balance CD 293培養基;

經過在100% Balance CD 293 培養基中的幾次傳代培養,傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×106 cells/mL,細胞活率大于90%,這說明細胞已經*適應了Balance CD 293 培養基。之后進行細胞的傳代培養時,細胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL,一般傳代2-3次后再進行轉染實驗。

注意: 一般細胞馴化過程中,前三代細胞的狀態可能不是很好,但一般從第四代開始狀態會有改善

細胞傳代

1)取細胞培養樣品,人工或儀器測定細胞密度以及活率;

2)計算傳代所需的細胞用量,建議起始細胞密度為0.2-0.4×106 cells/mL。建議復蘇的細胞至少培養兩代后再用于其他用途。傳代培養體積建議為15-20 mL100 mL的培養瓶)或50-60 mL250 mL 的培養瓶);

3)將細胞置于37℃,5%CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養,3-4天傳代一次。

細胞轉染在Balance CD 293培養基中,采用商業化轉染試劑(例如 Gibco 293Fectin™

ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )或 PEI 可以實現對 HEK293 細胞的高效轉染。

細胞復蘇

1)迅速取出凍存的細胞,在37℃水浴條件下進行解凍(可以在水中輕輕晃動,時間控制在60s以內);

2)輕輕地混勻細胞并將融化的細胞全部移至15mL無菌離心管中,逐滴加入10 mL預熱到37℃的培養基,離心換液(100 g,5 min)去除全部上清,加入新鮮培養基重懸,使得細胞密度達

0.4-0.6×106 cells/mL;

3)將細胞置于37℃,5%CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養;

42-4天后通過人工或儀器測定細胞的密度以及活率,如果細胞密度達到1.0×106 cells/mL,活率達到85%以上則可進行傳代培養;

5)如果細胞密度低于1.0×106 cells/mL,則建議對細胞進行離心(100 g,5 min),然后重懸于20-30 mL 的新鮮培養基中使得細胞密度為0.4-0.6×106 cells/mL 左右,并繼續培養至細胞正常生長則可進行傳代培養。

細胞凍存

1)凍存細胞時,要選擇處于對數生長期同時細胞活率在90%以上的 HEK293 cells ;

2)事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養基的體積;

3)制備細胞凍存液:46.25% 的新鮮Balance CD 293培養基+46.25% 條件Balance CD 293 培養基,混合之后再加入7.5% DMSO,存放在4℃,一般為當天用當天制備;

4)對細胞樣品進行計數;

5)取樣計數,以100 g3-5 min的條件離心收集細胞,然后用凍存培養基( 4℃ )重懸細胞,使得細胞密度為 5-10×106 cells/mL;

6)取樣計數,調整細胞密度;迅速分裝細胞到無菌的凍存管中,一般2 mL 的凍存管放1-1.5 mL,貼好標簽,密封;

7)將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預冷)中,置于-80℃ 冰箱(每分鐘下降1℃),過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。


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