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透射電鏡樣本準(zhǔn)備方法及要求
更新時(shí)間:2023-12-27   點(diǎn)擊次數(shù):2128次

以下所有樣本必須新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!

 

1、 動(dòng)物組織樣本

  1-3min內(nèi)取樣,取材前可提前準(zhǔn)備裝有電鏡固定液的培養(yǎng)皿,將小組織塊離體取下后立即投入培養(yǎng)皿內(nèi),用手術(shù)刀在培養(yǎng)皿的固定液中進(jìn)行切割成小塊,取樣組織體積控制在以下尺寸(1mmX1mm×1mm正方體、1mm×1mm×3mm長方體狀、1mm×2mm×3mm薄片狀)。固定液滲透能力有限,超出此范圍后組織會(huì)無法

透射電鏡圖片.png

固定,后續(xù)實(shí)驗(yàn)無法完成,務(wù)必請重視此過程。

 


  取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定)。

  取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。

  組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)4度避光固定24h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時(shí)樣本可保存1個(gè)月左右

2、 植物組織樣本

  取材要求同動(dòng)物組織樣本。

  組織投入固定液后需要進(jìn)行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進(jìn)固定液內(nèi),組織不能漂浮在固定液表面。(抽氣做出來的效果會(huì)好一些)

3、 細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞:

(看細(xì)胞凋亡的,需要把培養(yǎng)液中的細(xì)胞也離心收集后固定)

方法一:消化法(實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟簧婕坝^察細(xì)胞膜相關(guān)的內(nèi)容  如:觀察緊密連接)

①培養(yǎng)好的細(xì)胞(細(xì)胞密度不超過70%)棄培養(yǎng)基,加入胰酶消化。

②胰酶消化好后(時(shí)間不宜過長),加培養(yǎng)基終止消化,吸管輕輕吹打至細(xì)胞起浮。吸入離心管,低速離心(不超過3000轉(zhuǎn)),3-5min左右,細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

③棄上清,加入電鏡固定液,細(xì)胞團(tuán)吹散重懸。

4度避光固定24h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

方法二:刮取法

①培養(yǎng)好的細(xì)胞(細(xì)胞密度不超過70%)棄培養(yǎng)基,加入電鏡固定液(固定液需提前恢復(fù)至室溫)。

②常溫避光固定5min左右,用細(xì)胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個(gè)方向輕輕刮下細(xì)胞,切記不要反復(fù)刮,避免細(xì)胞刮破。

③用巴氏吸管把細(xì)胞液吸入離心管內(nèi),放入離心機(jī)(不超過3000轉(zhuǎn)),低速離心3-5min左右,細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

④棄固定液后加新的電鏡固定液,細(xì)胞團(tuán)吹散重懸。

4度避光固定24h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀有綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液4度避光固定24h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

 

4、 細(xì)菌樣本

長于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)4度避光固定24h,再轉(zhuǎn)移至4°保存, 4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

 

懸浮細(xì)菌孢子等:離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液4度避光固定24h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

5、 病毒

破碎組織細(xì)胞,粗離心去除細(xì)胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,體積至少50ul,遠(yuǎn)距離干冰凍存運(yùn)輸,近距離4°保存運(yùn)輸,盡快滴片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(噬菌體 4度運(yùn)輸)

6、 外泌體囊泡等

客戶自己完成外泌體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,,體積至少50ul,遠(yuǎn)距離干冰凍存運(yùn)輸,近距離4°保存運(yùn)輸,盡快制片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數(shù)小時(shí)內(nèi)完成滴片負(fù)染,否則做出的效果很不理想甚至觀察不到)

7、 納米材料等無機(jī)材料

直接準(zhǔn)備粉劑,或用純水或無水乙醇懸浮,常溫保存運(yùn)輸即可(需要超聲的備注)。做負(fù)染后電鏡觀察拍照。


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